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      English

      食品微生物檢驗GB4789.2-2016菌落總數測定及注意事項

      發布時間:2020-08-28      瀏覽次數:18940    分享:

      一、菌落總數定義和衛生學意義

      ?菌落總數定義:指在一定條件下(如需氧情況、營養條件、pH、培養溫度和時間等)每克(每毫升)檢樣所生長出來的菌落數

      ?衛生學意義:菌落總數測定是用來判定食品被細菌污染的程度及衛生質量,它反映食品在生產過程中是否符合衛生要求,以便對被檢樣品做出適當的衛生學評價。菌落總數的多少在一定程度上標志著食品衛生質量的優劣。


      二、GB4789.2-2016菌落總數測定(平板法)

      1. 菌落總數檢驗流程圖


      2. 結果計數

      ?可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位(colony-formingunits,CFU)表示。 

      ?選取菌落數在30CFU~300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30CFU的平板記錄具體菌落數,大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。


      ?其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數。

      ?當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長勢,則將每條單鏈作為一個菌落計數。

      3. 結果計算

      ?若只有一個稀釋度平板上的菌落數在30~300CFU之間,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(mL)樣品中菌落總數結果。

      ?若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

      ?若所有稀釋度的平板菌落數均小于30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

      ?若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。

      ?若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU~300CFU之間,其中一部分小于30CFU或大于300CFU時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

      ?若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時,按式(1)計算:


      4. 結果報告

      ?菌落數小于100CFU時,按“四舍五入”原則修約,以整數報告。

      ?菌落數大于或等于100CFU時,第3位數字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數字,后面用0代替位數;也可用10的指數形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數字。 

      ?若所有平板上為蔓延菌落而無法計數,則報告菌落蔓延。

      ?若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效。

      ?稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以?CFU/mL為單位報告。

      ?注:菌落總數結果計算與報告方式實例見以下表格

      編號

      稀釋倍數及菌落數

      10-1

      10-2

      10-3

      菌落總數

      報告方式

      平皿1

      平皿2

      平皿1

      平皿2

      平皿1

      平皿2

      (CFU/g或ml)

      (CFU/g或ml)

      1

      0

      0

      0

      0

      0

      0

      ﹤1×10

      ﹤10

      2

      24

      26

      5

      7

      0

      0

      250

      250或2.5×102

      3

      多不可計

      多不可計

      150

      160

      15

      20

      15500

      16000或1.6×104

      4

      多不可計

      多不可計

      236

      245

      35

      33

      24955

      25000或2.5×104

      5

      多不可計

      多不可計

      236

      245

      25

      33

      24476

      24000或2.4×104

      6

      多不可計

      多不可計

      多不可計

      多不可計

      320

      330

      325000

      330000或3.3×105

      7

      多不可計

      多不可計

      310

      320

      28

      26

      27000

      27000或2.7×104

      8

      多不可計

      多不可計

      295

      325

      22

      20

      29500

      30000或3.0×104

      9

      菌落蔓延

      菌落蔓延

      菌落蔓延

      菌落蔓延

      菌落蔓延

      菌落蔓延

      菌落蔓延

      菌落蔓延

      三、質量控制和疑難解析

      1. 質量控制

       ?實驗室過程中,每批樣品稀釋液都要做空白對照。

       ?為了控制環境污染,每次檢驗過程中,于檢驗臺上打開兩塊計數瓊脂平板,并在檢驗環境中暴露不少于15分鐘,將此平板與本批次樣品同時進行培養,以掌握檢驗過程中是否存在來自檢驗環境的污染。

       ?定期使用大腸埃希氏菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC6538和枯草芽孢桿菌ATCC6633或相應定量活菌參考品,在P2實驗室或陽性對照實驗室內,用適當的食品樣品進行陽性實驗驗證,并進行記錄,次驗證實驗至少每2個月進行1次。

      Q-Strain定量質控菌株


      2.疑難解析

      1:為什么水產品與其他食品中菌落總數檢測時所采用的培養條件不同?

      水產品產自海水或淡水,其溫度較低,因而在制定水產品的食品安全檢驗時選擇了30±1℃進行培養,培養時間為72 ±3h。

      2:當高稀釋度平板上的菌落數反而比低稀釋度平板上菌落數高時,如何處理?

      首先結果不能直接記錄報告。應針對此結果進行原因分析,并對剩余樣品進行重復實驗,如確認結果如此,則表示樣品中可能有影響菌落計數結果的抑菌物質,應使用稀釋、中和劑、過濾等方式去除樣品中的抑菌物質再進行檢測、報告。

      3:當所有平板上都菌落密布時,結果如何報告?

      不應報告多不可計,應在稀釋度最高的兩個平板上,分別任意取2cm2,計數其中的菌落數,計算每2cm2的平均菌落數,乘以平皿面積(如平皿直徑為90mm,則乘以平皿面積63.6cm2),再乘以稀釋倍數報告。

      四、菌落總數測試片法

      1. 原理:由輕便防水紙質材料做支撐,其上覆蓋干燥培養基層(營養物質、凝固劑、選擇抑制劑、顯色劑)和透明隔水膜組成,經輻照滅菌。菌落總數檢測片可用于食品、飲料等菌落總數計數,含有四氮唑指示劑菌落為紅色。

      菌落總數測試片

      HANDY PLATE 菌落總數測試片

      2. 特點優勢:

       ?菌落計數特別方便(容易判讀),紅色菌落,易于食品顆粒分開,無菌落重疊現象;

       ?菌落分布特別均勻;

       ?避免了培養基對細菌熱損傷有關;

       ?菌落蔓延或半透明菌膜現象很少發生

       ?經濟環保 無粉塵,體積小,重量輕,易儲運 保質期長干制無水培養基,性質穩定,保質期更長



      3. 操作注意事項

       ?接種時避免氣泡產生。

       ?將測試片的透明面朝上置于培養箱內,堆疊片數不超過20片。

      五、所需培養基試劑和質控菌株

      用途

      貨號

      名稱

      規格

      樣品稀釋

      CP0630

      生理鹽水

      盒(袋裝)225 mL×10袋

      CP0511A

      磷酸鹽緩沖液(PBS)

      盒(瓶裝)225 mL×6瓶

      CP0640

      磷酸鹽緩沖液(PBS)

      盒(袋裝)225 mL×10袋

      022117

      磷酸鹽緩沖液(PBS)

      瓶(干粉)250 g

      CP0310

      生理鹽水

      盒(管裝)9 mL×20支

      平板計數

      022070

      平板計數瓊脂(PCA)

      瓶(干粉)250 g

      CP0830

      平板計數瓊脂平板(PCA)

      盒(平板)90 mm×20

      022070P1

      平板計數瓊脂(PCA)

      瓶(顆粒)250 g

      HANDYPLATE微生物測試片

      HP001

      菌落總數測試片

      20片/包

      Q-Strain定量質控菌株

      QS011A

      大腸埃希氏菌(ATCC25922)

      110-1100 CFU/瓶

      QS011B

      大腸埃希氏菌(ATCC25922)

      (0.6-2.0)×107 CFU/瓶

      QS008A

      金黃色葡萄球菌(ATCC6538)

      110-1100 CFU/瓶

      QS008B

      金黃色葡萄球菌(ATCC6538)

      (0.6-2.0)×107 CFU/瓶

      QS004A

      枯草芽孢桿菌(CMCC(B) 63501)

      110-1100 CFU/瓶

      QS004B

      枯草芽孢桿菌(CMCC(B) 63501)

      (0.6-2.0)×107 CFU/瓶


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