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      English

      關于細胞培養基顏色變化的小知識

      發布時間:2022-07-28    瀏覽次數:303

      傳統細胞基礎培養基是紅色的,因為其中含有酚紅,弱堿性的酚紅呈紅色,作為細胞培養pH指示。同時,由于緩沖體系的原因,要維持弱堿性的pH值需要使用二氧化碳培養箱。

      是否所有的細胞培養基均適用同樣的CO2濃度?其實不然,CO2濃度的選擇取決于NaHCO3濃度。CO2和溶液中的-HCO3形成緩沖體系,使得整個培養體系的pH值維持在弱堿性(7左右),這也是哺乳動物細胞生長的最適pH值。當培養基長時間暴露在空氣中是,-HCO3會迅速分解,pH值快速升高,視覺觀感上即是從紅變紫。當再次將培養基放到細胞培養箱中后,在CO2的作用下,又會緩慢地從紫變回紅色。

      左圖為與空氣接觸時間過長,pH升高后顏色;右圖為正常培養基顏色

      左圖為與空氣接觸時間過長,pH升高后顏色;右圖為正常培養基顏色

      不同的細胞培養基的NaHCO3濃度不一樣,使用不用的細胞培養基應選擇與之對應的CO2濃度:

              NaHCO3 (g/L) 濃度<1.5時,所需CO2濃度為4%;
            NaHCO3 (g/L) 濃度處于1.5-2.2時,所需CO2濃度為5%;
            NaHCO3 (g/L) 濃度處于2.2-3.4時,所需CO2濃度為7%;
            NaHCO3 (g/L) >3.5時,所需CO2濃度為10%。

      隨著細胞不斷生長,pH值逐漸不斷下降(由于乳酸的代謝性積累),培養基會變成黃色。當我們發現培養過程中培養液的pH發生不正常地變化時,我們需要這樣做:

      1、確定是否使用不當的二氧化碳濃度:依據培養基中的碳酸氫鈉濃度來增加或降低培養箱中的二氧化碳百分比。對于2.0至3.7 g/L的碳酸氫鈉,分別使用5-10%的二氧化碳濃度?;驌Q用不依賴二氧化碳的培養基。

      2、確定是否組織培養瓶蓋子過緊:將蓋子擰松1/4圈。

      3、確定是否碳酸氫鹽緩沖不充分:加入HEPES緩沖液,使最終濃度達到10-25 mM。

      4、確定是否培養基中含有錯誤的鹽分:請在CO2條件下使用Earle's鹽培養基,在大氣環境下使用Hanks'鹽培養基。

      5、確定是否細菌,酵母或真菌污染:丟棄培養物及培養基,嘗試對培養物進行去污染。

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